Los Darkstalkers, al ser los seres más poderosos del planeta, son quienes representan la última defensa contra esta amenaza alienígena. Cada uno de ellos, sin embargo, tiene sus propias ambiciones. Por ejemplo, Demitri Maximoff, un vampiro aristócrata, busca dominar tanto a los humanos como a otros Darkstalkers y establecer su reinado de terror. Por otro lado, Morrigan Aensland, una súcubo caprichosa y poderosa, es heredera del trono del inframundo, pero prefiere la diversión y la emoción de las batallas que implican luchar contra seres poderosos, mostrando una actitud más despreocupada.
Otros personajes, como Jon Talbain, el hombre lobo, luchan por razones más personales. Talbain, que alguna vez fue humano, busca redimir su alma y encontrar un propósito más allá de su maldición. Victor von Gerdenheim, el monstruo de Frankenstein del juego, desea encontrar su humanidad y busca desesperadamente la aceptación de su creador, quien le dio vida y luego lo rechazó. Anakaris, un faraón no-muerto, quiere restaurar su antiguo imperio y reclamar la gloria de su civilización perdida.